在古老的传说中,圣杯被认为是耶稣在最后晚餐中使用的杯子,可以赐予人长生不老的力量。一次探险活动中,人们发现了记载圣杯位置的碑石,这吸引了许多疯狂的人想要找到它。印第安纳琼斯博士是其中一员,甚至他的父亲老琼斯也卷入其中,但他在留下圣杯笔记后便离奇失踪。琼斯来到威尼斯,与约好的史奈达博士会面。通过线索,他们在图书馆找到了圣盾,却遭遇了十字剑兄弟的追杀。经历了许多波折,琼斯最终找到了老琼斯。与此同时,史奈达的纳粹身份也被揭穿,笔记被抢走,圣杯即将落入纳粹手中。为了拯救圣杯,父子俩开始联手,上演了一场惊险的大戏!